脑内接种的实验果然成功了。狂犬病的研究，向前迈进了一大步。不过，还有新的困难等待着路易斯。

按照处理炭疽病或猪丹毒等的做法，将狂犬病的病原微生物分离出来，用适当的培养液培养，按理说，应该可以证明狂犬病菌的存在才对，但是这却行不通。有病菌是确实的，不过用显微镜却观察不到。路易斯想：“可能是这种微生物实在太小，就连显微镜都看不到。”

他的推论是正确的。

因为引起疾病的微生物中，确实有的小到用显微镜也看不到。比如说，流行性感冒和小儿麻痹的病原体就是属于这一类。

路易斯将兔子的头盖骨钻孔，注射病毒，兔子得狂犬病死了。他马上取出死兔脊髓注射在健康的兔子脑中。就这样，一个接着一个，重复同样的实验下去，发现从注射到病发的日数越来越短。在接近100次的时候，发病的时间减少到7天左右了。将此病毒注射入狗脑，发现毒性现在已经非常地强烈。经长期的兔脑培养，狂犬病毒变得纯粹了。

路易斯每天早上都仔细观察注射了纯粹病毒的动物的状态，并且记录在表中，他还预言：“这只兔会一个星期就死亡，那只狗该活得久一点。”他的预言竟然非常准确。

这一群从事于科学研究的人，为了获得这一纯粹的病毒，花费了相当长的时间！

第一号兔子死了接着是第二号的手术，第二号兔子死了接着是第三号的手术……如此地培养病毒，到了第一百号的时候，花的时间已将近3年。

路易斯凭借忍耐和努力，使他的研究步步前进。着手狂犬病研究后的第四年，终于达成了目标的一半。

最后需要解决的是，狂犬病的预防法，如能顺利解决，这个研究也就完成了。

“能不能像炭疽病或猪丹毒一样，减弱狂犬病毒的毒性，做成疫苗呢？”路易斯已经在向最后的目标迈进。

路易斯把因狂犬病而刚死亡的兔子的脊髓抽出，像鸡霍乱一样，放在清洁的空气中干燥。随着日子递增，毒性减小，14天后几无毒性了。将这些脊髓与蒸馏水混合研磨后，用皮下注射的方式注射到几只狗的身上。然后用第十三天的注射；再然后用第十二天的……这样逐渐增强毒性，最后用取自刚死亡的毒性很强的注射，结果这几只狗都没得病。再让这几只狗被狂犬来咬，或者用狂犬脑中取得的病毒来注射，也都没有患狂犬病。

控制了狂犬病免疫状态的路易斯，邀请持有公平立场的委员会鉴定这一实验。

教育部部长接纳了这项请求，于1882年5月底，以医科大学教授为主，组成了委员会。

委员会立刻开始工作。路易斯完成了狂犬病的预防法，并由委员会证明他的研究正确无误。

路易斯继续研究的结果表明，狗被狂犬咬了之后，注射疫苗可以防止狂犬病。

不过，这种预防法能不能应用在人类身上呢？虽然这对狗完全有效，但是在人身上却不知能不能显出同样的效果。