路易斯在医学方面，花费最大力量研究的是狂犬病。之前，他把炭疽病、鸡霍乱、猪丹毒等全部征服了，但是对于狂犬病的征服，却十分困难。越是困难就越迎难而上，这就是路易斯的本性。

1880年，路易斯着手于狂犬病的研究。这一年的12月，研究狂犬病的某一兽医，心想他自己没有办法解决这种难题，或许巴斯德先生可以做得到。于是他带了两只狂犬前去拜访路易斯。路易斯就从这个时候起，开始狂犬病的研究。

当路易斯开始热衷于狂犬病研究的时候，他的某一友人说：“巴斯德先生不知道科学的界限，科学能解决的问题毕竟是有限的，我怕他徒劳无功。”持有这种想法的人不在少数。

不过也有人认为：“就巴斯德先生以往的辉煌成就来看，他或许也能防止狂犬病。”

狂犬病有麻痹性的和狂躁性的两种。患了麻痹性狂犬病的犬，运动神经被麻痹，腰部无力以致不能站立，颚张开，舌下垂，不断地流口水，最终导致死亡。狂躁性的症状是眼睛血红，见到手或棍子接近，就想噬咬攻击，有时痛苦地悲声嚎叫。

因为不知道狂犬病的防治方法，所以被狂犬所咬到的人只好认命，大都不接受治疗，静静地等死。

路易斯跟之前一样，先从让健康动物患狂犬病的实验开始。实验所用的动物是兔和狗。

他把狂犬的唾液注射到健康动物的体内，发现唾液对兔也好，对狗也好，显然是有毒性的，可是致病力并不确实，就是说，有的发病了，有的没有。

后来路易斯用血液实验，仍然得不到明确结果。

路易斯不因两次或三次的失败而失望，他又开始另一项新的实验。

仔细观察狂犬病的症状，可以明确察知这是神经系统的疾病。于是，路易斯取出狂犬的脑，加水研磨，然后注射于健康的动物而加以观察。

这项实验的成绩很好，比唾液更为确切地引起了狂犬病。但并不一定绝对导致发病，有很多实验品没有生病。即使生病的实验品，从注射到病发，有的竟然要经过一段很长的时间。

有没有更确切的方法能够引起狂犬病呢？

路易斯想到将病毒直接注入狗脑试试看。他马上设计了新的实验。

实验计划是这样的，先把将要注射病毒的狗紧绑在手术台上，将它麻醉后，用一种特殊机械将狗的头盖骨钻开一个小孔，可以见到它的脑部覆盖着一层硬膜，将注射器刺入膜内注射病毒，接着用石炭酸消毒伤口，最后缝合皮肤，实验宣告完成，前后仅需数分钟而已。

路易斯虽然想马上动手，但迟迟下不了手。孩童时期就心地善良的他，很厌恶任何粗暴、残忍的行为。

做简单的皮肤注射时，狗稍微一叫，路易斯就觉得它很可怜，总是善加安抚一番。如今要在狗的头盖骨上钻孔，想到就心痛。

路易斯迟迟不肯进行新手术，终于有一天，他的学生鲁趁路易斯不在的时候，自行动手了。

第二天他向路易斯报告：“老师，昨天我已做好了手术。”

“啊，真是可怜啊！那只狗一定伤了脑，引起麻痹，不能走了吧，可怜的狗！”路易斯担心地说。

鲁没有答话，他笑着走到地下室，把狗带到了实验室。狗很活泼，在实验室欢快地跑来跑去。路易斯见了非常高兴，轻轻摸了摸狗的脑袋。

14天之后，这条狗发作了猛烈的狂犬病，不久就死了。这正是确切地引起狂犬病的方法。他们后来重复多次实验，结果都一样。